来源: 网络 2025-02-27
1. 电化学发光原理
电化学发光免疫分析包括了电化学反应和化学发光两个过程。二价的三联吡啶钌Ru（bpy）32+作为标记物，有标记物的生物分子与配体发生特异的结合反应后，进入流动测量室，此时电发光过程被启动。
电化学反应过程：
在一定的电压作用下，Ru（bpy）32+释放电子成为Ru（bpy）33+。
同时，电极表面的三丙胺（TPA）也释放电子成为阳离子自由基TPA+，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基TPA·。
化学发光过程：
具有强氧化性的Ru（bpy）33+和具有强还原性的三丙胺自由基TPA·发生氧化还原反应，结果使Ru（bpy）33+还原成激发态的Ru（bpy）32+*。
激发态的Ru（bpy）32+*以荧光机制衰变并以释放出一个波长为620nm光子的方式释放能量，而成为基态的Ru（bpy）32+。
循环过程：
上述化学发光过程后，反应体系中仍存在二价的Ru（bpy）32+和三丙胺（TPA），使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行，这样，整个反应过程可以循环进行。
通过上述的循环过程，测定信号不断地放大，从而使检测灵敏度大大提高。
2. 电化学发光免疫原理
上述的电化学发光过程产生的光信号的强度与二价的Ru（bpy）32+的浓度成线性关系。将Ru（bpy）32+与免疫反应体系中的一种物质结合，经免疫反应、分离后，检测免疫反应体系中剩余二价的Ru（bpy）32+经上述过程后所发出的光，即可得知待检物的浓度。
3. 免疫反应过程
抗原抗体反应：
ECLIA中的抗原抗体反应类型与酶发光免疫测定技术一致，主要也有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种模式。
以临床上常用的HBsAb的含量测定为例，采用双抗体夹心法：生物素标记的HBsAg, 三联吡啶钌络合物标记的HBsAg与待测样品共同孵育，形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素的复合体；和亲和素标记的磁微粒孵育，形成三联吡啶钌-HBsAg-HBsAb-HBsAg-生物素-亲和素磁微粒复合体。
B和F分离：
常用磁颗粒分离技术。蠕动泵将反应液吸入流动室，磁微粒由磁铁吸附到电极表面。
电化学发光反应与结果计算：
蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，由光电倍增管检测光强度，光强度与Ru（bpy）32+的浓度呈线性关系，根据标准曲线算出待测抗原的含量。
最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
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